简答题

蓝-白筛选的原理。

正确答案

有些载体含有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和氨基端145个氨基酸的编码序列,这个编码区中插入了一个多克隆位点,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶羧基端部分序列的宿主细胞。宿主和载体编码的β-半乳糖苷酶片段各自均无酶活性,但它们可以互补形成具有酶学活性的蛋白质,使X-gal转化成蓝色的代谢产物,出现蓝色的菌落(菌斑)。如果在多克隆位点上插入外源DNA片段,将使载体的lac Z基因灭活,不能互补形成有活性的β-半乳糖苷酶,结果菌落(菌斑)呈现白色。由于这种颜色标志,重组克隆和非重组克隆的区分一目了然,这种筛选方法称为“蓝-白筛选”。

答案解析

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