简答题

叙述膜片钳技术及操作模式。

正确答案

原理:在电压钳技术上发展起的新技术,该技术是将一根玻璃吸管电极吸附到仅几个立方微米的细胞膜表面上,以实现记录单通道的离子电流。若微吸管电极末端直径为1微米,则膜单元(膜片)的直径也为1微米。
根据不同的实验目的,钳位操作也不同,p85图3-15记录了4种钳位操作。
用玻璃微吸管吸附细胞,“细胞贴附”在吸管顶端形成高阻封接,由于其电性能完全绝缘,微吸管阻抗相对较低,微电极与膜片电极之间的电位与电流基本上反映了膜片的特征。直接在微吸管上施加电压对膜片进行电压钳位,可以高分辨地测量膜电流或通道电流。
1、在完成高阻封接后,将微吸管提起,膜就会被拉出,在吸管末端形成一小泡。在空气中暴露几秒后,小泡破裂,再将吸管放入预先制备好的溶液中,膜片内侧与溶液接触便形成“内面向外”的膜片。
2、用灌注无钙氯化钾溶液的微吸管吸附细胞,形成高阻封接后,直接向微吸管内加电脉冲或短暂的高负压,可使吸附在吸管末端内的细胞膜破裂(膜片破裂但不破坏封口),电极与胞内溶液直接相通,电流或扩散物进入细胞内,形成“全细胞记录”方式,可以研究直径为5-10微米大小的细胞。在“全记录细胞”方式下提起吸管,就形成“外面向外”的膜片。内面向外和外面向外的膜片又称“切割膜片”。

答案解析

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