简答题

什么是基因工程菌,工程菌构建的基本过程和各阶段的主要任务是什么,所涉及基因工程原理是什么? 

正确答案

将目的基因导入细菌体内使其表达,产生所需要的蛋白的细菌称为基因工程菌。
工程菌构建的基本过程如下:目标基因克隆(PCR、文库筛选、化学合成)→表达载体构建(酶切、链接)→遗传转化与筛选(外源基因导入与培养)→工程菌(获得新形状、功能、产生物质)
酶切:在特异位点上催化双链DNA分子的断裂,产生相应的限制性片段。(DNA+缓冲液+限制性内切酶;37℃,1小时;加热、加EDTA终止;电泳检查酶切完整性)
链接:DNA双链上相邻的3’羟基和5’磷酸基团共价结合形成3’-5’磷酸二酯键,使原来断开的DNA缺口重新连接起来。(载体片段和基因片段,缓冲液,连接酶;16-26℃,数小时;70℃加热10min终止反应)
转化:把外源基因导入宿主细胞的过程。(氯化钙法向大肠杆菌导入外源基因)

答案解析

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