(1)氧基酸的活化与转运:在氨基酰tRNA合成酶催化下,氨基酸的羧基被活化,并与tRNA的3’-OH生成酯键而相连,然后,氨基酸被转移到tRNA的末端5’-CAA-3’序列。
(2)核糖体循环:在核糖体上,活化氨基酸按照mRNA的指令被翻译并缩合成多肽键的循环反应过程,称为核糖体循环。它可分为3个阶段:
1)起始阶段:真核生物的此阶段有3个步骤。
①eIF-3与40S小亚基结合,可促进80S核糖体解离出60S大亚基;
②在eIF-3,eIF-1与eIF-4A,eIF-4B等起始因子协助和ATP参与下,mRNA借助帽部结合到40S小亚基上,并向下游移动和扫描,从而使mRNA的起始密码AUG在Met-的
反密码位置固定下来,于是翻译起始;
③通过eIF-5的作用,结合Met-tR-
与GTP,再和mRNA的40S小亚基与60S大亚基结合,形成80SMet-
起始复合物。
2)肽链延长阶段:
①进位(注册)。与mRNA下一个密码相对应的氨基酰tRNA进入核糖体的A位,此步需GTP,Mg
2+和EF参与;
②成肽。在转肽酶的催化下,将P位上的tRNA所携甲酰蛋氨酰基或肽酰基转移到A位的氨基酰tRNA上,与其α-氨基缩合成肽键。P位上已失去甲酰蛋氨酰基或肽酰基的tRNA从核糖体上脱落,使P位留空;
③转位。核糖体向mRNA的3’端滑动相当于一个密码的距离,同时使肽酰基tRNA从A位移至P位。此步需GTP,Mg
2+和EF参与。核糖体的A位留空,与下一个密码相对应的氨基酰tRNA即可进入A位,重复上述循环过程,多肽链乃得以不断延伸。
3)肽链终止阶段:核糖体沿mRNA链滑动,直到终止密码进入A位:
①识别。RF识别终止密码,亦进入A位;
②RF使转肽酶变为水解酶,tRNA与多肽链间的酯键被水解,多肽链即释出;
③解离。通过水解GTP,使核糖体与mRNA分离,tRNA、RF脱落。最后,核糖体解离成大、小亚基。