简答题

简述2-3种检测蛋白质间相互作用的方法。

正确答案

(1)酵母双杂交系统:是利用杂交基因通过激活报告基因的表达探测蛋白-蛋白的相互作用。真核生物转录因子具有DNA结合结构域(BD)和转录激活结构域(AD),这两个结构域分开时仍分别具有功能,但不能激活转录,只有它们以适当途径在空间上较为接近时,才能重新具有转录因子活性,并激活报告基因表达。
(2)免疫共沉淀(IP):基本原理是抗原和抗体之间专一性地相互作用而沉淀,从而保留下来,其是一种经典的检测蛋白质相互作用的方法。其实验过程比较简单,裂解细胞后,加入抗体,抗原被沉淀下来后洗涤,去除非特异性结合,再分析复合体。抗体可以是单克隆,也可以是多克隆。
(3)蛋白质芯片:蛋白质芯片可以用来大规模筛选蛋白质之间的相互作用,将一个蛋白质芯片与荧光标记的探针蛋白孵育,洗脱非特异性结合的蛋白后,可以通过扫描芯片上的荧光点来检测稳定的相互作用蛋白点。

答案解析

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