简答题

质粒不稳定常见的是分裂不稳定,试述提高质粒稳定性的方法。

正确答案

1、选择适当宿主,如重组质粒在大肠杆菌中比较稳定。
2、培养基加入选择性压力如抗生素,抑制质粒丢失菌的生长。
3、采用两阶段培养法。在培养的第一阶段以增加菌体的生长达到一定密度为目的,外源基因不表达,从而使工程菌与质粒丢失菌的比生长速率的差别减小,增加了质粒的稳定性;第二阶段再诱导外源基因的表达。
4、控制培养条件如温度、培养基组分等,使工程菌体现出有优势的比生长速率。间歇供氧和改变稀释速率可以提高质粒的稳定性。
5、在质粒构建时插入一段能改良宿主细胞生长速率的特殊DNA片段,能起到稳定质粒的效果。
6、剔除质粒上不需要的DNA部分,选取不含可转移因子的质粒。
7、固定化重组菌以提高工程菌的稳定性。

答案解析

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