简答题

简述转座子标签法。它的操作思路和使用条件是什么?

正确答案

定义:用转座子DNA做为标签(探针)克隆发生插入突变的基因,即转座子标签法transposon tagging。
操作思路:
1)用具有转座子的亲本杂交
2)对子代进行突变体筛选
3)用突变株DNA构建基因文库
4)用转座子做探针分离突变基因中Tn
5)对筛选的Tn两端侧翼序列亚克隆,作探针
6)筛选野生基因文库获得所要的基因
使用条件:
1、亲本之一必需含有活跃的转座子 
2、所用Tn为已分离与克隆的—即序列已知Tn    
3、需进一步鉴定克隆基因(因为转座子并非只插入目的基因这一处)
4、要获得目的性状突变株,需要对子代进行大量筛选,因为突变株出现频率为10-4 --10-6,该频率和不稳定性是选择突变株的依据.

答案解析

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