酵母计算公式为:酵母细胞个数=所数小方格中细胞总数×400×10
4×稀释倍数/所数的小方格数
酵母细胞的计数,常采用在显微镜下观察并用血球计数器计数。上述公式也就是血球计数器计算每ml样液中所含酵母细胞数的计算公式。血球计数器是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器,它的形状如下图所示,它的规格有两种,一种叫希利格式,另一种叫汤麦式。
希利格式(也叫做16×25型)每个血球计的计数室中,以4个中方格为一排,16个中方格为一个大方格,每1中方格中有25个小方格,整个计数室内有16×25=400小方格,所以,公式中要乘上400。每1个小方格边长为0.05mm,加上盖玻片后的空间深度为0.1mm,则每1个小方格的容积为0.05×0.05×0.1=0.00025(mm
3),400个小方格的总容积为400×0.00025=0.1(mm
3)。(1ml=1,000mm
3),因取样液为1ml,所以,1万个0.1mm
3才等于1ml,这就是上式中10000的来历。
出于原样液中一般含细胞数较多,不利于准确计数,需要加入成倍的无菌水稀释,所以,公式中要乘上样液的稀释倍数。计数时为了方便起见,有时不把所有方格中的细胞数都数出来,而只数其中的几个中方格、这样所数出的总数除上所数的小方格数,就可得出每个小方格中的细胞数,所以公式中要除以所数的小方格数。
汤麦式(又叫25×16型),它的计数室内是以5个中方格为一排,25个中方格为1大方格,每个中方格中共有16个小方格,共计也是25×16=400个小方格,其方格的总容积与希利格式相等。
计数时,常以取原数液1ml,加入4ml或9ml的无菌水稀释成5或10倍的样液,取出血球计数器,盖好清洁的专用盖玻片,用无菌的移液管吸取一滴混合均匀的样液注入血球计数器的计数室内,装满整个计数室,使其中不得有气泡产生,否则应重新制片。然后放入显微镜下观察、计算。当采用汤麦式血球计数器时,应数最左上、最右上、最左下、最右下和中间一个中方格的酵母细胞数,即数出了5×16个小方格中的细胞数,公式中所除小方格数则就是5×16=80。如果采用希利格式血球计数器计数时,通常数四角的4个中格中的细胞数,即所数小方格数为4×25=100,则公式中除以小方格数就是100。
根据以上原理的分析,每毫升原样液中酵母细胞计算公式就是:酵母细胞个数/ml=所数小方格中细胞总数×400×10
4×稀释倍数/所数的小方格数