简答题

简述革兰氏阳性细菌与阴性细菌细胞壁的成分,结构的差异并阐述革兰氏染色的机理和实验步骤,以及如何避免假阴性和假阳性的发生。

正确答案

染色机理:
G+细菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次多和交练致密,故遇脱色剂乙醇处理时,因失水而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇的处理不会溶出缝隙,因此能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内,使其保持紫色。
G-细菌细胞壁外膜中脂质含量很高,肽聚糖层,遇脱色剂乙醇时,以脂质为主的外膜迅速溶解,这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘的复合物的溶出,因此细胞褪成无色,这时再经沙黄等红色染料复染,就使G-细菌呈现红色,而G+细菌仍保持紫色。实验步骤:
1.涂片
2.初染:在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液,染1分钟,倾去染液,流水冲洗至无紫色。
3.媒染:先用新配的路哥氏碘液冲去残水,而后用其覆盖涂面1分钟,后水洗。
4.脱色:除去残水后,滴加95%酒精进行脱色约15-20秒,后立即用流水冲洗。
5.复染:滴加番红染色液,染3-5分钟,水洗后用吸水纸吸干。
6.镜检:观察染色结果并绘图。
革兰氏染色避免假阴性和假阳性的发生的方法:
1.要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色
2.涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性
3.脱色不足,革兰氏阴性菌被误染成革兰氏阳性菌;脱色过度,革兰氏阳性菌被误染成革兰氏阴性菌。脱色时间一般为20-30秒。
4.避免用去壁细胞,去壁细胞革兰氏染色均呈阴性反应

答案解析

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