简答题

在进行代谢物酶促终点法测定的实验设计时,主要应考虑哪些问题?

正确答案

主要有下述6个方面:
(1)所用工具酶的特异性正是因为酶作用具有特异性,所以复杂的生物样品不经分离就可以对其中特定成分进行定量检测,而不受其他物质的干扰。在酶促反应中,要求指示酶要有更高特异性,这样测定所受的干扰会更小。
(2)酶对待测物的亲和力,即Km的大小要合适在保证测定线性的前提下,Km要尽量小。
(3)酶的用量酶促终点法测定代谢物的酶用量要足够大,以保证反应能在临床化学检验可接受的较短的时间内(一般为1~3分钟)达到终点。
(4)工具酶中的杂酶应低于允许限。
(5)反应平衡点反应应朝正反应方向进行,反应体系中所用的试剂底物对酶应构成“0级反应”。如果反应的平衡常数太低,为使反应朝正反应方向进行,主要有增加底物浓度、偶联反应移去生成物、改变反应pH等方法。
(6)对于试剂中的附加剂(如稳定剂、防腐剂、赋形剂)加入后,应不抑制酶的活性,不影响试剂的稳定性,不与底物和体液中的物质作用。和其他测定方法学一样,酶法测定还要考虑到试剂的稳定性、均一性,测定的准确性、精密度。

答案解析

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