简答题
请你设计一个测定南湖水中大肠菌群最近似数(MPN)的实验方案(包括实验原理或依据、方法、主要用具和实验安排等)。
正确答案
(1)原理:依据大肠菌群的概念。指一群在37度培养24小时能分解乳糖产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
(2)主要用具:取样瓶、试管、吸管、小倒管、平皿、微量乳糖发酵管、乳糖胆盐发酵管培养基、麦康凯琼脂培养基、革兰氏染色制剂、制抹片的用具、显微镜等。相关用具及培养基等均须灭菌。
(3)方法:
1.初发酵试验:将样品做适当稀释,每个稀释度接种3支乳糖胆盐发酵管,置37度恒温箱内,培养24h,如所有发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
2.分离培养:将产气的发酵管分别转种在麦康凯琼脂平板上,置37度恒温箱内,培养24h。
3.复发酵试验:在麦康凯琼脂平板上,挑取红色的大肠菌群可疑菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种微量乳糖发酵管,置37度恒温箱内,培养24h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性、无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性;如乳糖管不产气或革兰氏染色阳性,则报告为大肠菌群阴性。
4.结果报告:根据上述检验结果,按照判定为大肠菌群阳性管数,查相关检索表,按表内所查得的数值,报告大肠菌群的最近似数。
(4)实验安排:
第一步:用具的准备及样品的采集。
第二步:做初发酵试验。
第三步:做分离培养。
第四步:做复发酵试验。
第五步:结果报告。