简答题

简述化学切割错配检测基因突变的基本原理及其优、缺点。

正确答案

化学切割错配(chemical cleavage of mismatch,CCM)通过在DNA:DNA或DNA:RNA异源杂合双链核酸分子中发生C错配(如A-C、T-C、C-C配对)处,能被羟胺和哌啶切割,如系T错配,能被四氧化锇切割的特点,先将野生型探针与待检样品杂交,再分别用羟胺、哌啶和四氧化锇处理;根据凝胶电泳中DNA片段数量和大小判断样品中有无突变、突变位置及类型等。
优点:准确率高,无非特异性切割,检出率高,达100%,结合荧光检测系统还可提高其灵敏度达1突变/10个细胞,可用于长达2kb片段。
缺点:步骤多,费时,使用有毒化学物质。

答案解析

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