正确答案
①重组人红细胞生成素的分离
(1)CM-Sephrose亲和层析柱预先用Na-HAc-异丙醇活化,并用20mmol/LTrisHCl平衡缓冲液平衡。
(2)收获培养基滤膜过滤后上CM亲和层析柱,平衡缓冲液平衡。
(3)0~2mol/LNaCl,20mmol/LTris洗脱液梯度洗脱。
(4)收集活性洗脱峰10mmol/LTris透析液透析过夜。
②重组人红细胞生成素的纯化
(1)透析后的活性组分上预先平衡的DEAE离子交换柱。
(2)0~1mol/LNaCl-Tris洗脱液梯度洗脱,收集活性洗脱峰。
(3)上10%乙腈平衡的RP-HPLC柱(C4填料),10%~70%的乙腈溶液梯度洗脱,收集活性洗脱峰。
(4)上凝胶柱(预先用20mmol/L柠檬酸盐缓冲液平衡),20mmol/L柠檬酸盐缓冲液平衡并洗脱,收集活性洗脱峰(红细胞生成素)