正确答案
①溶解粗干扰素:配置缓冲液(超纯水,pH7.5磷酸缓冲液,0.45μm滤器和10ku超滤系统,百级层流下收集),冷却至2-10℃。在均浆器中完全溶解粗干扰素。
②等点沉淀与疏水层析:磷酸调节至pH5.0,沉淀杂蛋白,离心收集上清液(含有人干扰素)。用NaOH调节上清液pH7.0,并用5M NaCl调节溶液电导值180ms/cm,上样,进行疏水层析,利用干扰素的疏水性进行吸附。在2-10℃下,用0.025M磷酸缓冲液(pH7.0)+1.6M NaCl进行洗涤,除去非疏水性蛋白。用0.01M磷酸缓冲液(pH8.0)进行洗脱,收集洗脱液,干扰素。
或②等电点沉淀与盐析:磷酸调节pH4.5,调节电导值40 ms/cm,2-10℃静置过夜,除杂蛋白。1000ku超滤膜过滤,除去大蛋白。调整溶液pH8.0,10ku超滤膜,0.005M缓冲液。
③阴离子交换层析与浓缩:0.01M磷酸缓冲液(pH8.0)平衡树脂,盐浓度线性梯度5~50ms/cm进行洗脱,2-10℃,配合SDS-PAGE收集干扰素峰。把目标馏分合并,调整溶液pH和电导值,10ku超滤膜,0.05M醋酸缓冲液(5.0)中透析。
④阳离子交换层析与浓缩:用0.1M醋酸缓冲液(pH0.5)平衡树脂。上样,相同缓冲
液冲洗。盐浓度线性梯度5-50ms/cm进行洗脱,配合SDS-PAGE收集干扰素峰。合并馏分,10ku超滤膜系统。
⑤凝胶过滤层析:0.15M NaCl的0.01M磷酸缓冲液(pH7.0)清洗系统和树脂。上样,相同洗脱液进行洗脱。合并干扰素部分。
⑥无菌过滤分装:0.22μm膜过滤干扰素溶液,分装,-20℃以下的冰箱中保存。