简答题

cDNA末端快速扩增法的主要操作步骤是什么?

正确答案

1.获得高质量总RNA:含有大量完整mRNA、tRNA、rRNA和部分不完整mRNA;
2.去磷酸化作用:带帽子结构的mRNA不受影响;
3.去掉mRNA的5‘帽子结构,加特异性RNA寡聚接头并用RNA连接酶连接;
4.以特异性寡dT为引物,在反转录酶的作用下,反转录合成第一条cDNA链,包含了寡接头的互补序列;
5.分别以第一链cDNA为模板进行RACE反应;
6.将纯化的PCR产物克隆到载体DNA中,进行序列分析。

答案解析

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