正确答案
1.PCR又称聚合酶链反应,是一种在体特异性外扩增目的核酸的的酶促合成反应。其基本原理是:在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下,利用DNA半保留复制和其在不同温度下变性复性的特性,人为控制温度——高温变性,低温复性,室温延伸,循环多次后,特异性扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。
2.引物设计原则是1. 长度为15~30个核苷酸2. 碱基随机分布,G+C的含量为45~55%
3.避免发夹结构的形成,引物的存在连续互补序列不超过3bp
4.引物之间不应存在互补序列,避免3 ′端互补重叠
5.引物的碱基序列与非扩增区域无同源性
6.引物3 ′端碱基一定与模板配对,最佳碱基选G和C ;
7.引物5 ′端可以修饰,如加酶切位点,突变位点,起始密码子,终止密码子等。