简答题

试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。

正确答案

(1)引物的长度一般15~30bp;
(2)引物扩增跨度:以500bp为宜,特定重要条件下可扩增长至10kb的片段;
(3)引物碱基:G+C含量以40%~60%为宜,A、T、G、C最好随机分布,避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列;
(4)避免引物内部出现二级结构:避免两条引物间互补,特别是3′端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异性的扩增条物;
(5)引物3′端的碱基必须与模板严格配对,而且尽量不要为A,最好选择T,因为3′端末位为T时错配几率大大降低;
(6)产物有或能加上合适的酶切位点;
(7)被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。

答案解析

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