简答题

如何提高用杂交筛选法进行重组噬菌斑的筛选的结果的可靠性?

正确答案

将硝酸纤维素膜覆盖在琼脂平板表面,使之与噬菌斑直接接触,噬菌斑中大量没有被包装的游离DNA及噬菌体颗粒便一起转移到膜上。可从同一噬菌斑平板上连续印几张同样的硝酸纤维素膜,进行重复实验,而且可以使用两种或数种不同的探针筛选同一套重组子,提高结果的可靠性。

答案解析

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  • 可以用核酸杂交筛选法进行()的筛选。

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  • 采用蓝白斑选择法时,蓝色菌落或噬菌斑是含有重组载体的克隆。

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  • Plaquehybridization噬菌斑杂交

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  • DNA重组通常包括如下五个步骤: ⑴获得需要的目的基因(外源基因)。  ⑵用重组DNA分子(重组质粒)转化受体细胞,使之进入受体细胞并能够在受体细胞内复制和遗传。  ⑶对获得外源基因的细胞或生物体通过发酵、细胞培养、养殖和栽培等,最终获得所需的遗传性状或表达出所需的产物。  ⑷经过限制性内切酶酶解和连接酶作用,形成重组DNA分子,并对其加以克隆和筛选。  ⑸对获得外源基因的受体细胞(转化子)进行筛选和鉴定。  上述五个步骤按通常的操作技术应依()顺序进行。

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