正确答案
①复苏：液氮冻存的CHO细胞系在37℃中水浴快速融化。无菌离心，弃上清。
②培养：加适量DMEM（10%小牛血清），37℃、CO2培养箱培养，连续传三代。
③消化：用胰蛋白酶消化贴壁细胞后，制成细胞浓度约为2.5×106个/ml。用于接种。
④反应器灭菌：加纤维素载体片及pH7.0的PBS缓冲液，高压灭菌。
⑤接种：排出PBS缓冲液，加DMEM培养基（含10％血清），接入种子细胞。
⑥贴壁培养：pH7，<50r/min，37℃，DO50-80%。
⑦扩增培养：80－100r/min。pH7，37℃。
⑧灌流培养：控制温度、DO、pH值等培养条件，进行无血清培养基连续培养。
⑨收获培养物：连续收获，4℃－8℃保存。
控制点：
①搅拌控制：接种后，搅拌速度缓慢，使细胞贴附于载体上，随着细胞数量的增加逐渐提高搅拌速度。
②温度控制：较为严格，恒定37℃
③pH值控制：7.2-7.4，输入CO2和碳酸氢盐溶液维持其恒定。
④溶解氧控制：在50-80％的范围内，通入氧气、空气、氢气或氮气的比例混合气体。
⑤葡萄糖控制：流加补料
⑥代谢废物控制：监测铵、乳酸盐类等，维持较低浓度，减少对细胞损害。