简答题

请设计一个实验确定某基因的启动子区?

正确答案

(1)利用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对启动子在受体细胞中调控基因表达的活性进行检测:采用基因枪法对受试细胞进行遗传转化,培养24h后在荧光显微镜下观察GFP基因的表达情况,并通过软件测定不同培养条件下GFP基因表达后的荧光强度,以较为准确的鉴定该启动子的活性大小,并达到鉴定与量化的目的。—GFP是一些腔肠动物所特有的生物荧光素蛋白,GFP在其他原核或真核细胞中,在紫外光或蓝光激发下都发出绿光,即发射团的形成无物种特异性,也不需要特异的辅助因子。
(2)利用核酸酶S1作图:三种不同的核酸酶—S1核酸酶、RNA酶、外切核酸酶VII可用来进行RNA定量确定内含子位置及鉴定在,克隆的DNA模板上mRNA的5`-末端和3`-末端的位置。含有目的mRNA的RNA样品与互补的DNA或RNA探针在利于形成杂合体的条件下温育。在反应末期,用核酸酶降解未杂合的单链RNA和DNA,余下的DNA-RNA或RNA-RNA杂合体用凝胶电泳分离,接着用自显影进行观察。当探针的摩尔数在杂交反应中过量时,信号强度与样品中目的mRNA的浓度成正比。可利用过量探针与系列定量的靶序列杂交作出标准曲线,从而准确估算出样品浓度。在真核系统中,S1核酸酶消化过的5`-末端通常代表转录起始点,而3`-末端代表聚腺苷酸化的位点。同样的策略可用来对拼接位点的5`-末端和3`-末端作图。

答案解析

相似试题
  • 请设计一个实验证明某基因存在一个内含子?

    简答题查看答案

  • 原核基因启动子区的Pribnow区()。

    单选题查看答案

  • 已知蛋白质P(由基因p编码,序列已知)可以在某动物传代细胞C(该细胞可在体外培养和传代)中激活基因g(序列已知)的转录,即P是基因g的一个转录因子,请你设计实验,确定基因g上游的转录因子P的调控区,并进行验证。

    简答题查看答案

  • 设计一个实验证明某基因存在选择性剪切?

    简答题查看答案

  • 酵母U6sRNA基因有一个TATA框位于上游,在基因内有一个弱的A框,基因下旅游的远端还有一个保守的B框。体外实验时,RNA聚合酶II和III都可以转录这个基因,但体内实验发现只有RNA聚合酶III可放转录它。如何确定该基因启动子的聚合酶特异性?

    简答题查看答案

  • 在大多数细菌操纵子中,结构基因通常紧靠在一起并由单个操纵序列启动子区调控,而在一些例子中结构基因分散在染色体上。请问这些基因是如何以简单的方式达到协同调节的?

    简答题查看答案

  • 在研究工作中分离得到一个与动物减数分裂直接相关的基因A,如果想由此获得该基因的单克隆抗体,请简要叙述实验原理及实验方案。

    简答题查看答案

  • 如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养?请写出实验的主要步骤。

    简答题查看答案

  • 设计一个实验方案,确定该种鱼是分批产卵还是不分批产卵?

    简答题查看答案